两段式（分步/二次）发酵是把发酵拆成两个有先后逻辑的阶段：前段常用酶或某菌株降解底物大分子、富集中间物，后段再用目标菌株定向代谢。它比单菌种单步更利于发挥多阶段协同，适合把大分子底物先“预处理”再定向转化（共发酵见 842、定向转化见 831）。
两段式的典型做法
数据锚点：分步定向共生发酵的专利做法是——先以酿酒酵母种液预发酵 12–18 h（28–30 ℃，通气量 1–1.2 vvm），降解底物的大分子物质并富集中间产物，再进行主发酵（专利，基于双发酵与牡丹花提取物的皮肤修护活性物（CN122557408A，Patsnap））；也有“先酶解糖化、后厌氧发酵”的双阶段工艺。
二次发酵的价值与适用
数据锚点：二次/依次发酵可用于定制产物谱——例如由自主分离的阿萨希丝孢酵母与长双歧杆菌婴儿亚种依次发酵制备发酵产物（专利，具有抗皱功效的二裂酵母发酵产物及其制备方法（全国科技企业知识转化平台））。适用场景：①底物大分子需先降解才能被目标菌利用；②单菌株无法同时完成“降解+定向转化”；③要分阶段制造/富集特定代谢物（发酵时长见 857、反应器见 829）。
研发与工艺要点
①阶段衔接：两阶段间的 pH、营养、氧状态切换要设计好，避免前段代谢物抑制后段菌（工艺参数见 43）；②灭菌/接种：若换菌株，两段间可能需要灭菌或调 pH，注意放大时的传质差异（放大见 819）；③产物谱验证：每阶段取样测成分曲线（检测见 847、发酵时长见 857）。
| 阶段 | 目的 | 要点 |
|---|---|---|
| 前段 | 降解大分子/富集中间物 | 酶或菌种匹配 |
| 后段 | 定向转化 | pH/营养切换 |
| 衔接 | 避免抑制 | 灭菌/传质 |
先铺垫、再转化。
研发与采购提示
考虑两段式时，先评估单菌单步是否已够；确需分阶段，确认供应商的阶段参数、菌株资质与产物谱，并以小试数据验证转化收益（定制需求书见 835、供应商评估见 226）。
要点总结
- 两段式=前段铺垫、后段转化。
- 典型做法：预发酵 12–18 h 降解大分子再主发酵。
- 适用于需先降解才能定向转化的底物。
- 注意阶段衔接、灭菌与放大传质。
数据口径与来源说明
分步定向共生发酵（酵母预发酵 12–18 h、28–30 ℃、通气 1–1.2 vvm 降解大分子再主发酵）引自基于双发酵与牡丹花提取物的皮肤修护活性物（专利 CN122557408A）；阿萨希丝孢酵母与长双歧杆菌婴儿亚种依次发酵制备发酵产物引自具有抗皱功效的二裂酵母发酵产物及其制备方法（全国科技企业知识转化平台，专利）。证据等级：专利/行业案例；具体工艺以研发实测为准。